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　　犬瘟热疾病综合诊断

　　2004年11月23日 点击：137次

　　　

　　犬瘟热是由副粘病毒科麻疹病毒属犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的犬科、鼬科、浣熊科等多种动物的一种急性、热性、高度接触性沾染病显微镜。该病在临床上以双相热性、卡他性鼻炎及随后引起的支气管炎、卡他性肺炎、严重的胃肠炎和神经症状为主要特点，少数病犬可见下腹部脓性皮疹及足垫角化过度。发病率几乎达100%，死亡率达30~80%不等，素有“毁灭性沾染病”之称电子显微镜。由于本病经常引起混杂感染及继发感染，给经济动物养殖业造成宏大的经济丧失。要减少犬瘟热病造成的经济丧失，尽早采用防治办法，因此对该病的诊断尤为主要。

　　1 临床诊断

　　临床诊断重要通过本病的风行特色、临床特点及类症病的辨别。

　　1.1 风行特色 在自然条件下可感染多种犬科野生食肉兽，如小熊猫、貉、貂、黄鼠狼，以及豺、狼、獾等。本病一年四季都可产生，冬春季多发。6月龄以内的幼犬特殊易感染，症状典范，死亡率极高。世界各地都有风行。

　　1.2 临床症状 体温呈双相热型。病初以呼吸道炎症为主，表示为流涕、打喷嚏、咳嗽，常为干咳，严重时鼻镜龟裂，呼出恶臭气体，流脓性鼻液，堵塞鼻孔，张口呼吸呈腹式。肺部听诊，支气管音粗厉，闻干性罗音或湿性罗音或捻发音。可视粘膜发绀，眼睑四周有散性出血点，眼睑干燥，呈脓性眼结膜炎，角膜溃疡，甚至穿孔。若以消化道炎症为主时，重要表示为食欲不振或废尽，呕吐，腹泻，排出带有黏液的稀便，有时带有血液。在后期呈现非化脓性脑炎并导致神经症状，流涎，空嚼，有时全身肌肉振颤，转圈，共济失调，口吐白沫，牙关紧闭，Zui后抽搐而逝世电子显微镜。

　　1.3 临床类症辨别 犬瘟热在临床上轻易与感冒、呼吸道疾病、胃肠炎、犬渺小病毒性肠炎、沾染性肝炎等相混杂，依据其临床特点与犬瘟热进行初步辨别诊断。单纯性胃肠炎时，无双相热型、无鼻、眼分泌物等。传染性肝炎时，有黄疸等。犬渺小病毒性肠炎呕吐激烈、频繁、饮水后立即产生呕吐，渴欲强烈，排出的番茄汁样血便次数多、数目大。感冒时体温升高，无双相热型，鼻流清涕，无流泪现象。而犬瘟热双相热型，眼、鼻有分泌物，严重时有脓性分泌物；病犬饮水后较少产生呕吐，初便秘，后腹泻，粪便稀薄、恶臭，有时混有气泡和血液；鼻、足垫过度角化；末期常呈现腹痛、肌肉振颤等神经症状，甚至惊厥直至逝世亡永新。

　　2试验室惯例诊断

　　2.1包涵体检讨 包涵体重要存在于膀胱、胆管、胆囊、肾盂上皮细胞内。取干净载玻片，滴加生理盐水1滴，用小刀在膀胱黏膜上刮取上皮细胞，与生理盐水混杂研匀，制成涂片，置空气中自然干燥后，用甲醇固定，苏木精-伊红染色后镜检。细胞核染成蓝紫色，永新，细胞浆呈淡玫瑰色，包涵体被染成红色。包涵体大多在胞浆内，1个细胞内可能含有1~10个多形性包涵体，但一般浮现圆形或椭圆形。程世鹏等（1999）分辨对用强毒攻毒、注射犬瘟热疫苗和正常狐貉进行检查，成果用强毒攻毒的狐貉发明了膀胱黏膜涂片中有包涵体的存在，而注射犬瘟热疫苗组和正常对比组则无包涵体的存在，对于临床发病动物检查同样可检查出包涵体的存在电子显微镜。

　　2.2 Dot-ELISA法诊断 金鑫等（2000）用树立的三抗体夹心法Dot-ELISA检测犬瘟热病毒（CDV）抗原，其抗原Zui低检出量为1.15ug/ml (0.57625ng/点)，经与惯例ELISA对104份自然感染犬的血液白细胞样本，60份眼结膜分泌物样本，73份脾、肝、淋巴结等脏器样本

　　作者简介：欧阳素贞（1955-），女，河南内黄人，本科，副教授，从事兽医微生物教学和研讨工作。

　　进行检测，检测的阳性率分离为92.31%、66.67%、83.56%和 90.72%、63.29%、81.86%；

　　两种办法检出的总阳性率分辨为83.54% (198/237)和80.17% (190/237)，总阳性符合率为95.96%，表明两者呈高度正相干 (r=0.92, P<0.01)。经电子永新察看验证比拟，三抗体夹心法Dot-ELISA检测的可信度为 94.74%[6]。

　　2.3免疫组化法诊断 免疫组化技术是在抗原抗体特异反映存在的条件下，借助免疫化学的手腕，检测抗原（或抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术，目前已普遍运用于人及动物传染病的病原鉴定和快速诊断，极大地进步了传染病的诊断和防治程度。

　　Gathumbi等 (1993)研讨证实，从脑、脊髓、肺、肠、膀胱、脾和淋巴结中均可检出 CDV抗原，其中中枢神经体系和肺是诊断的Zui佳组织，脱髓鞘性脑炎和肺炎是犬瘟热的主要病变永新。Miry等 (1983)采用过氧化物酶法（PAP）技巧检查患犬瘟热性肺炎的病犬组织，以为有病变的脏器组织均可检出CDV抗原，且敏感性显明高于包涵体检查电子显微镜。Mitchell等 (1991)采取PAP和单抗技术证实了试验性感染CDV脱髓鞘性脑炎病犬的脑组织中，不论是脱髓鞘部位还是未见显着病变的白髓的神经胶质细胞中均可见到病毒抗原。阳性细胞包含星状细胞、神经元细胞、室管膜细胞、脉络丛细胞、脑膜细胞和血管四周的炎性细胞[9]。

　　Kristensen等 (1978)采用免疫荧光（IF）技术研讨了患犬瘟热性脑炎病犬的CDV散布情形，成果从全体病犬的脑组织中均检出CDV抗原，在灰质和白质中均可见到病变。在灰质中，抗原主要散布于神经元细胞中，包涵体呈成堆的大的颗粒样或细小颗粒状或粉尘样凑集在胞浆中；在白质中主要存在于星状细胞中[10]。Liu等(1957)采取IF技术证实，在人工感染CDV后3~4天，即可从循环血单核细胞中检出CDV抗原，病犬第一次发热时Zui具传染性[11]。

　　2.4 犬瘟热病毒的分离和鉴定

　　2.4.1病料的采集 采用何种病料，应依据疾病的类型和病情的发展情形而定。在体温开端上升的病毒血症早期，淋巴组织的沾染Zui为严重，因此Zui好从淋巴细胞和淋巴组织分离病毒。对于急性病兽或急性死亡动物，病毒散布于全身各器官，故应从脏器中分离病毒。在慢性病例或疾病的中后期多从肾脏或脑组织分离病毒。

　　2.4.2病毒分别 犬瘟热病毒能够适应鸡胚和多种组织细胞培育物，但并非所有毒株都能生长良好。犬瘟热病毒通过绒毛尿囊膜接种9~11日龄鸡胚，经3~10代后，于接种后5~7天绒毛尿囊膜增厚，有的可引起豆斑。有报道以为，分别犬瘟热病毒Zui好的方式是用犬和貂的巨噬细胞造就物，接种2~3天后呈现圆形多核巨细胞。巨细胞轻易脱落，而且并非所有的细胞都形成巨细胞，故应多次细心察看。

　　2.3.3病毒的鉴定 通过[7]检讨、酶标SPA染色和琼脂扩散实验等方式进行病毒鉴定。电镜下察看可见犬瘟热病毒粒子浮现多形性，多数为球形，病毒粒子的直径为110~550nm之间。核衣壳呈螺旋状，总长度为1000nm，螺旋直径15~19nm，螺旋中心5nm的孔，螺距5~6nm，核衣壳由囊膜包裹，其内部为M，厚约5nm，表面为H和F两个糖蛋白组成的纤突，纤突长度为9nm[8]。

　　遇秀玲等（1998）利用酶标SPA（葡萄球菌A蛋白）染色法对接种CDV的Vero细胞进行染色后发明，有相应CDV抗原部位，同样滴加CDV阳性血清的对比细胞片，未见相应反应。CDV MD- 77株沾染后 3、6、9、12 h，胞浆可见渺小阳性颗粒（呈淡黄色至棕褐色着染）；1天后阳性反响显明加强，多见于胞浆，胞浆亦可见大空泡；2后天坏死细胞呈强阳性反映，细胞间拉网；3~4天后合胞体细胞呈强阳性反响，坏死细胞呈棕褐色至黑褐色；5天后阳性反应主要见于新生细胞胞浆；6天后合胞体细胞呈大圆形，阳性反映主要见于胞浆；7天后全部合胞体细胞呈一棕褐色大团块；8天后大部分细胞脱落，残留细胞呈强阳性反响[12]。

　　任文陟等（1994）应用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫动物制备了琼脂扩散抗体，并对患犬瘟热病貉肝脏中的抗原进行检测，与电镜成果相比拟，阳性符合率达85.7%，阴性符合率为75%，以为是一种较为特异、敏感、操作简便的办法[13]。

　　3分子生物学诊断

　　随着分子生物学技巧的飞速发展，尤其是分子遗传学的提高，大大进步了病毒的诊断程度，特殊是核酸杂交、PCR技巧的利用，大大进步了疾病诊断的正确性、敏感性和特异性。

　　李金中等（1999）直接从逝世亡大熊猫肝脏提取细胞总RNA，经反转录后用犬瘟热病毒的1对引物扩增出了约320bp的片断。此产物经纯化、序列剖析表明，其片断2个引物间长度为281bp，与预计片断大小雷同。此毒株在核苷酸和氨基酸程度与北京犬野毒株、哈尔滨犬野毒株、某疫苗弱毒株、Onderstepoort弱毒株和海豹瘟热病毒2型毒株的同源性分辨为92.2%和98.9%、92.5%和98.9%、91.5%和94.6%、92.9%和98.9%、98.2%和100%。这样就进一步断定了大熊猫的犬瘟热病毒沾染[14]。

　　Zurbriggen等用地高辛标志Ｎ基因互补的特异性RNA探针具有高度敏感性，可查证单个感染细胞中存在的目标核酸序列，特异性较强，不发生背景[15]。Shin 等应用RT-PCR已能检测出患狗外周血单核细胞中的犬瘟热病毒的核衣壳蛋白基因 (N)及应用pRVSV载体胜利表达了CDV的N基因[16,17]。

　　目前，在兽医临床工作中，犬瘟热的诊断多采取临床诊断、包涵体检讨和ELISA法。对于病毒的分别、鉴定，免疫组化法和分子生物学等诊断方式，尚未推广利用。


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