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　　潘氏实验

　　简介

　　潘氏试验是指脑脊液中的蛋白测定，也称球蛋白定性试验，其原因是脑脊液在病变时，蛋白有不同水平的增添，多为球蛋白增长，在潘氏试验中球蛋白遇酚而变性，涌现沉淀而成阳性。

　　潘氏试验

　　潘氏试剂的配制：在热的200ml蒸馏水中加入10ml苯酚（石碳酸），强力混杂后，放置37摄氏度48小时。

　　应用时放置室温，汲取其上清液10ml于12*100mm的试管中，滴入一滴脑脊液，在黑色背景下观察其是否有白色沉淀，而叛定阴阳性。

　　临床意义

　　正常脑脊液含有极微量的蛋白质，其中以白蛋白为主，潘氏试验为阴性反响。化脓性脑膜炎，结核性脑膜炎及颅内出血等，均见蛋白质增添，且多为球蛋白增长，潘氏试验呈阳性反映。

　　第十章 脑脊液检查

　　

　　第二节 化学检查

　　一、脑脊液潘氏试验意义 阳性见于各种脑膜炎、脑炎、脑出血、蛛网膜下腔阻塞和出血、多发性神经炎、变形性脊椎病等。

　　二、脑脊液葡萄糖测定意义

　　1. 增卓识于：糖尿病、乙型脑炎、病毒性脑膜炎、脊髓灰质炎、脑卒中、脑肿瘤等。

　　2. 下降见于：化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、真菌性脑膜炎、蛛网膜下腔出血、原发性或转移性脑膜肿瘤等。

　　三、脑脊液氯化物测定意义

　　1. 结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎、真菌性脑膜炎、脊髓灰质炎、中毒性脑炎、脑肿瘤等脑脊液中氯化物有不同水平减少。

　　2. 尿毒症、肾炎、浆液性脑膜炎时可增添。 脑脊液白细胞分类计数

　　化验先容：此检讨在某些疾病的辨别诊断上有主要意义。白细胞总数正常时，一般不做白细胞分类。如超过正常数值，则需做白细胞分类。脑脊液中白细胞为中性粒细胞、淋巴细胞和内皮细胞（包含单核细胞）三类。

　　　　临床意义：

　　　　在白细胞超过正常值、对其进行分类后，可有以下几种情况。

　　　　（1）中性粒细胞增多：常见于急性细菌性沾染或慢性感染急性发作时。还可见于脊髓灰质炎早期结核性脑膜炎早期。

　　　　（2）淋巴细胞增多：常见于结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎经过治疗后，以及布氏杆菌

　　性脑膜炎、脑脓肿和脑膜邻近感染、脑和脑膜的病毒性感染、霉菌感染、立克次体感染、螺旋体感染、疫苗接种后或感染后脑脊髓炎，也可见于寄生虫沾染、脱髓鞘病、脑瘤、结节病和白塞氏综合征等

　　　　参考值：0－8个/mm3

　　一、蛋白质定性检讨（潘氏球蛋白定性试验）

　　1、潘氏球蛋白定性试验原理 脑脊液中蛋白质重要是球蛋白与苯酚联合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，发生白色混浊或沉淀。

　　2、试剂

　　5%苯酚溶液：取纯苯酚25ml，加蒸馏水至500 ml，用力振摇，放置37℃温箱内1~2天，待完整溶解后，置棕色瓶内保留。

　　饱和苯溶液：取苯酚10 ml，加蒸馏水至100 ml，充足混匀，置进37℃温箱中数小时，见底层有酚析出，上层即为饱和酚溶液。避光保留，一般置棕色瓶内保留。

　　3、操作 取试剂2~3 ml，置于小试管中，用毛细滴管滴进脑脊液1~2滴，在玄色背景下立即察看成果。

　　4、结果断定

　　阴性（－）：无混浊，清楚透明，不显雾状。

　　极弱阳性（±）：微呈白雾状，对光不易看到，在玄色背景下才干看到。

　　弱阳性（+）：呈灰白色白雾状。

　　阳性（++）：呈白色薄云雾状混浊。

　　强阳性（+++）：呈白色絮状沉淀或白色浓云块状。

　　Zui强阳性（++++）：立即形成白色凝块。

　　5、方法学评价 潘氏（Pandy）试验所需标本量少，操作简略，结果观察较为明白，临床试验室常用此法。但该方法过于敏感，有一部分正凡人也可涌现极弱阳性（±）结果。

　　6、注意事项

　　（1）红细胞过多时，须先离心使细胞沉淀，汲取上清液进行试验。

　　（2）试验中所用试管应十分干净，否则易呈现假阳性结果。

　　（3）所用试剂苯酚如不纯，亦可引起假阳性反映；室温低于10℃，酚饱和度低，亦可引起假阳性成果。

　　7、正常参考值 正常脑脊液中蛋白质含量仅是血浆蛋白的1/200，即0.2~0.4g/L，其成分以白蛋白为主，故蛋白定性实验成果为阴性或极弱阳性（±）。

　　8、临床意义 有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反响，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经体系疾病、脊髓灰白质炎、风行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反映，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反响。

　　李凡他试验

　　李凡他试验先容：

　　　　

　　　　李凡他试验是作为差别渗出液和漏出液Zui重要，Zui常用的办法之一。临床上一般用于鉴别胸水及腹水是否炎症的一项惯例检查，阳性(+)表现积液为渗出液，阴性(-)表现积液为漏出液。

　　李凡他试验正常值：

　　　　 　　暂无考证。

　　李凡他试验临床意义：

　　　　 　　异常结果：阳性和阴性分辨有不同的病症，阳性时渗出液由炎症引起，常见于感染性、非感染性因素，有时可见于恶性肿瘤。阴性是漏出液属非炎症性，基础形成原由于：血浆胶体渗透压下降，血管内压力增高，淋巴管阻塞等。

　　　　须要检查的人群：存在浆膜腔积液的人群。

　　第八章 浆膜腔积液检验

　　

　　试验一 浆膜腔积液理学检讨

　　【目标】 控制浆膜腔积液(serous cavity fluid)理学检查的内容和方式。

　　【原理】 因漏出液与渗出液的产活力制不同，故各种体液的色彩、透明度、凝固性等也有不同，可以通过肉眼和感观的方式差别。

　　【器材】 比重计、比重筒。

　　【标本】 浆膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　1．观察颜色 以肉眼观察浆膜腔积液色彩变更。渗出液混浊，可呈深浅不同的黄色、红色、乳白等颜色；漏出液多为淡黄色，稀薄透明，根据观察到的颜色如实描写报告。

　　2．观察透明度 察看时可轻摇标本，以肉眼观察浆膜腔积液透明度的变更。漏出液清楚透明；渗出液可呈现不同浊度，如“微浑”、“浑浊”等，依据视察到的透明度如实描写报告。

　　3．观察凝固性 倾斜浆膜腔积液试管，肉眼视察有无凝块形成，结果可根据标本情形不同用“无凝块”、“有凝块”报告，渗出液常有凝块，而漏出液一般无凝固性。

　　4．测定比密 充足混匀的浆膜腔积液迟缓倒入比重筒中，以能悬浮起比重计为宜。将比重计轻轻放进装有浆膜腔积液的筒中并加以捻转，待其静置自由悬浮于浆膜腔积液中(勿使其接触比重筒壁)，读取液体凹面相重合的比重计上的标尺刻度数值并作记载。

　　【参考值】

　　1．外观 漏出液为浅黄色清晰透明或微混；渗出液为黄色、黄绿色、红色、咖啡色等不同的色彩，混浊。

　　2．比密 漏出液＜1.015；渗出液＞1.015。

　　【注意事项】

　　1．器材 坚持比重计清洁、刻度精确，测定比密后，应立即浸泡、清洗清洁，以免蛋白质凝固在比重计上，影响正确性。如标本量少，可采取折射仪测定比密。

　　2. 标本 浆膜腔积液标本一般分装在2支试管内送检：一管作细胞学检查，为避免标本凝固引起细胞变性损坏而影响结果，应加100mg/ml乙二胺四乙酸二钠或二钾抗凝，每 0.1ml可抗凝6ml标本；另一管不加抗凝剂，用以察看有无凝固现象。

　　3．断定结果

　　（1）当标本颜色或透明度转变不显明或难以观察时，可在试管后以白色或黑色为背景，灯光下细心观察。

　　（2）标本呈黄色一般为渗出液，多见炎症性积液，呈云雾状混浊样，甚至呈脓性，凝固性高、比密增高；浅黄色透明的标本一般为漏出液，清晰或微混、一般无凝固。

　　（3）当标本中含有大批的纤溶酶时，可将纤维蛋白溶解，使渗出液看不到凝块，应联合其它试验剖析标本情形。

　　4．妥当处置残余标本 检验完毕后余留的标本和所用的器皿应按《临床试验室废物处置原则》（S/T/49）的规定处置，以免造成污染。

　　实验二 浆膜腔积液显微镜检查

　　【目标】 控制浆膜腔积液显微镜检查，包含有核细胞计数和分类的内容、方式。

　　【原理】 根据浆膜腔积液中的各种细胞形态特色，通过计算必定量体积的浆膜腔液体内细胞数或者将标本染色分类计数，盘算出浆膜腔积液中各种细胞的数目或百分比。

　　【器材】

　　1．试管、试管架。

　　2．吸管、吸耳球。

　　3．微量吸管、胶吸头、干脱脂棉。

　　4．玻棒。

　　5． 改进Neubauer计数板、盖玻片、绸布。

　　6．显微镜。

　　【试剂 】

　　1． 冰乙酸、白细胞稀释液。

　　2． 瑞氏染液或瑞?吉染液。

　　【标本】 浆膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　（一）有核细胞计数 方法与脑脊液雷同，如细胞数较多的利用稀释法进行检查。

　　1．直接计数法 实用于有核细胞数不高的清楚透明或微浑的浆膜腔液。

　　（1）往除红细胞：在小试管内放入冰乙酸1～2滴，转动试管，使内壁黏附少许冰乙酸后倾往。滴加混匀浆膜腔液3～4滴，混匀，放置数分钟损坏红细胞。

　　（2）充池：用微量吸管吸取浆膜腔液（混匀破坏红细胞后）充入2个计数池。

　　（3）计数：静置2～3min后，低倍镜计数2个计数池内四角和中心大方格共10个慷慨格内的有核细胞数。

　　（4）盘算：10个慷慨格内有核细胞总数即每微升浆膜腔液的有核细胞数，再换算成每升浆膜腔液的有核细胞数。

　　2．稀释计数法 实用于浑浊的浆膜腔积液。

　　（1）稀释并损坏红细胞：根据标本内有核细胞多少情形。用白细胞稀释液对标本进行?定倍数稀释混匀，放置数分钟，破坏红细胞。

　　（2）充池：用微量吸管汲取浆膜腔液（混匀稀释后）充入1个计数池。

　　（3）计数：静置2～3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中心大方格共5个大方格内的细胞总数。

　　（4）计算：依据5个慷慨格内的有核细胞总数和稀释倍数盘算每升浆膜腔积液的有核细胞数。

　　（二）有核细胞分类

　　1．直接分类法 有核细胞计数后以低倍镜改变为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞形态和细胞核形态进行分类，共分类计数l00个有核细胞，分辨计数单个核细胞(包括淋巴细胞、单核细胞及间皮细胞)和多个核细胞(粒细胞)的百分率。若白细胞数不足l00个，则直接写出单个核细胞和多个核细胞具体数。

　　2．涂片染色分类法 在抽出穿刺液后立即以1 000r/min离心5min，取沉淀物制成均匀的薄片，置于室温下或37℃恒温箱内敏捷干燥，瑞氏或瑞?吉染色后油镜分类计数100个有核细胞。一般标本中可见淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等。作肿瘤细胞检查时利用巴氏或HE染色检查。

　　【注意事项】

　　1．细胞计数及分类计数

　　（1）必要时可采取细胞玻片离心沉淀仪收集细胞，以进步白细胞分类计数的正确性。

　　（2）作细胞形态学检查及分类的涂片一般不少于5张，以备查找肿瘤细胞，必要时同时制备厚片，涂片干燥前可用乙醚乙二醇等量混杂，固定30min。

　　（3）有核细胞计数及染色分类计数，应包含粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和间皮细胞。分类进程中若发明间皮细胞和不能分类的异常细胞应另外描写，并作HE、巴氏染色查找肿瘤细胞。

　　2．方法选择

　　（1）有核细胞分类计数误差大，尤其是陈腐性、细胞变形的标本，故推举采用涂片染色分类法计数。

　　（2）血细胞分析仪实用于血性积液的检测．其他积液可采取流式原理的尿液剖析仪检测

　　3．结果剖析 常用于漏出液与渗出液的辨别。漏出液中有核细胞常＜300×106/L，渗出液常＞500×106/L。见表8-1。

　　表8-1 浆膜腔积液特色及可能原因

　　浆膜腔积液特色

　　可能原因

　　以多形核白细胞为主

　　化脓性炎症或早期结核性积液

　　嗜酸性粒细胞增多

　　结核性渗出液

　　淋巴细胞增多

　　提醒慢性炎症。如结核性渗出液、病毒沾染、SLE的多发性浆膜炎

　　以间皮细胞及组织细胞增多为主

　　提醒浆膜上皮脱落茂盛，如淤血、恶性肿瘤等

　　心包积液有核细胞＞1 000×106/L

　　提示心包炎

　　腹水有核细胞＞500×106/L，中性粒细胞＞50%

　　提醒细菌性腹膜炎

　　癌细胞

　　诊断恶性肿瘤

　　试验三 浆膜腔积液粘蛋白定性试验

　　【目标】 控制浆膜腔液粘蛋白定性(rivalta test , 李凡他试验)的办法。

　　【原理】 浆膜腔液漏出液中，只有微量的粘蛋白，李凡他实验为阴性。当炎症时浆腹腔上皮细胞被刺激，分泌粘蛋白增多。粘蛋白是一种酸性糖蛋白，等电点pH为3～5，因此，可在稀乙酸中呈现白色沉淀。

　　【器材】

　　1． 100m1量筒。

　　2． 滴管、胶吸头。

　　【试剂】

　　1． 冰乙酸。

　　2． 蒸馏水。

　　【标本】 浆膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　1．加试剂 在100m1量筒加入2～3滴冰乙酸，再加l00ml蒸馏水，充分混匀（pH3～5），静置数分钟，偏光显微镜报价。

　　2．加标本 将浆膜腔积液靠近量筒液面垂直逐滴轻轻滴下。

　　3．观察结果 立即在黑色背景下观察有无白色云雾状沉淀天生及其降落程度。

　　4．判定结果 见表8-2。

　　表8-2 浆膜腔液粘蛋白定性结果判定

　　结果

　　断定根据

　　阴性

　　清晰不显雾状

　　阳性

　　(土)

　　渐呈白雾状

　　(+)

　　参加标本即涌现白雾状

　　(++)

　　白薄云状

　　(+++)

　　白浓云状

　　5． 报告方法 阴性或阳性（阳性水平根据表8-2报告）。

　　【注意事项】

　　1．标本 血性浆膜腔积液经离心沉淀后，用上清液进行检查。

　　2．器材与试剂

　　（1）量筒的高度与蒸馏水的量要足够。

　　（2）依据漏出液重要成分制备基本液，在其中参加不同量的粘蛋白作为阳性对比。

　　（3）在量筒中参加冰乙酸及蒸馏水后应充足混匀，否则会发生假阴性。

　　3．pH 保证pH3～5的酸碱度，加冰乙酸不宜过多，以免pH阔别浆膜粘蛋白的等电点发生假阴性。

　　4．结果判定

　　（1）加入标本后立即在玄色背景下细心视察结果。如浑浊显明，下沉迟缓，中途消散者为阴性。

　　（2）标本中球蛋白含量增高时试验可呈假阳性，必要时可进行辨别试验，办法是先将标本滴入未加冰乙酸的蒸馏水中观察，如有白色云雾状沉淀，此乃球蛋白不溶于水所致。

　　5．结果分析 常用于漏出液与渗出液的鉴别。漏出液常阴性，渗出液常阳性。

　　6．本试验是一种初步的简易筛检试验，对区分渗出液与漏出液特异性意义不高。


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