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细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态察看

https://www.optical17.com 来源:原创 日期:2011-8-9 10:20:23
   实验四细菌、放线菌、霉菌和酵母菌的细胞形态与菌落形态观察

  一、试验目标

  1.观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。  

  2.放线菌、酵母菌和霉菌的细胞形态观察。

  二、实验原理  

  菌落形态是指某种微生物在必定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。细菌、放线菌、酵母菌和霉菌,每一类微生物在必定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征,应用观察这些特点,来区分各大类微生物及初步辨认、鉴定微生物,方式简便快速,在科研和生产实践中常被采取。

  三、实验资料和用具

  圆褐固氮菌,枯草芽孢杆菌,灰色链霉菌,酿酒酵母,青霉的单个菌落平板,白色葡萄球菌(Staphylococcus albus);Bouin氏固定液,0.01%结晶紫溶液,酒精等。

  显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环。

  四、操作步骤

  (一)四大菌落的形态观察

  观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征,并按实验菌落特征描写的办法记载成果。  

  (二)放线菌的形态观察

  用镊子警惕取出用插片法造就的放线菌培育皿中的一张盖玻片,将其背面附着的菌丝体擦净。然后将长有菌的一面向上放在干净的载玻片上,用低倍镜、高倍镜察看。找出3类菌丝及其分生孢子,并绘图。注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差别。

  (三)霉菌的形态视察

  1.粘片观察:取一滴棉蓝染色液置于载玻片中心,取一段透明胶带,打开霉菌平板培养物,粘取菌体,粘面朝下,放在染液上。镜检。

  2.假根观察:将培养根霉假根的平皿打开,取出皿盖内的载玻片标本,在附着菌丝体的一面盖上盖玻片,置显微镜下观察。只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝,观察时注意调节焦距以看清各种结构

  (四)酵母菌的形态观察

  酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定

  1.以无菌水洗下PDA斜面造就的酿酒酵母菌苔,制成菌悬液。

  2. 取0.05%美蓝染色液1滴,置载玻片中心,并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀,染色2~3min,加盖玻片,在高倍镜下视察酵母菌个体形态,区分其母细胞与芽体,区分逝世细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。

  3. 在一个视野里计数逝世细胞和活细胞,共计数5~6个视野。

  酵母菌死亡率一般用百分数来表现,以下式来盘算:

  死亡率=死细胞总数/逝世活细胞总数×100%

  五、注意事项

  1.用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新鲜、表面湿润;在产孢培养基上加大移种量,可进步子囊形成率;通过微加热增添酵母的死亡率,易于观察死亡细胞。

  2.培养放线菌中要注意,放线菌的生长速度较慢,培养期较长,在操作中应特殊注意无菌操作,严防杂菌污染。

  3.玻璃纸法培育接种时注意玻璃纸与平板琼脂造就基间不宜有气泡,以免影响其表面放线菌的生长,

  六、实验报告

  1. 将观察到的微生物菌落特征填进下表中。

  2. 计算酵母菌的死亡率

  3.根霉和青霉形态图,示各部。

  七、问题和思考

  1. 试比拟细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落形态的差别?

  2.酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有何差别?

  3.在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和睦生菌丝?

  一、实验目标

  1.察看细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特点。  

  2.放线菌、酵母菌和霉菌的细胞形态观察。

  二、试验原理  

  菌落形态是指某种微生物在必定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。细菌、放线菌、酵母菌和霉菌,每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征,应用观察这些特点,来区分各大类微生物及初步辨认、鉴定微生物,方式简便快速,在科研和生产实践中常被采取。

  三、实验资料和用具

  圆褐固氮菌,枯草芽孢杆菌,灰色链霉菌,酿酒酵母,青霉的单个菌落平板,白色葡萄球菌(Staphylococcus albus);Bouin氏固定液,0.01%结晶紫溶液,酒精等。

  显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环。

  四、操作步骤

  (一)四大菌落的形态观察

  观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征,并按实验菌落特征描写的方式记载成果。  

  (二)放线菌的形态观察

  用镊子警惕取出用插片法培养的放线菌培养皿中的一张盖玻片,将其背面附着的菌丝体擦净。然后将长有菌的一面向上放在干净的载玻片上,用低倍镜、高倍镜观察。找出3类菌丝及其分生孢子,并绘图。注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差别。

  (三)霉菌的形态观察

  1.粘片观察:取一滴棉蓝染色液置于载玻片中心,取一段透明胶带,打开霉菌平板培养物,粘取菌体,粘面朝下,放在染液上。镜检。

  2.假根视察:将培养根霉假根的平皿打开,取出皿盖内的载玻片标本,在附着菌丝体的一面盖上盖玻片,置显微镜下观察。只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝,观察时注意调节焦距以看清各种结构。

  (四)酵母菌的形态观察

  酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定

  1.以无菌水洗下PDA斜面培育的酿酒酵母菌苔,制成菌悬液。

  2. 取0.05%美蓝染色液1滴,置载玻片中央,并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀,染色2~3min,加盖玻片,在高倍镜下观察酵母菌个体形态,区分其母细胞与芽体,区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。

  3. 在一个视野里计数死细胞和活细胞,共计数5~6个视野。

  酵母菌死亡率一般用百分数来表现,以下式来计算:

  死亡率=死细胞总数/死活细胞总数×100%

  五、注意事项

  1.用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新颖、表面湿润;在产孢培养基上加大移种量,可进步子囊形成率;通过微加热增添酵母的死亡率,易于观察死亡细胞。

  2.培养放线菌中要注意,放线菌的生长速度较慢,培养期较长,在操作中应特殊注意无菌操作,严防杂菌污染。

  3.玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡,以免影响其表面放线菌的生长,

  一、实验目的和内容

  目标:懂得自然存在的酵母菌及其形态构造。懂得酵母菌发生子囊孢子的条件及其形态。

  内容:

  1.察看酵母菌个体形态。

  2.观察酵母菌的假菌丝和滋生进程。

  3.观察自然状况的酵母菌。

  二、试验资料和用具

  酿酒酵母(Saccharomyes cerevisiae)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)斜面菌种。

  PDA培养基、麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基)、0.05%美蓝染色液(以pH6.0的0.02mol/L磷酸缓冲液配制)、碘液、0.04%的中性红染色液%孔雀绿,0.5%沙黄液、95%乙醇;

  显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环、V形玻璃棒、放置一个三角形玻璃棒支架的培养皿。

  三、操作步骤

  (一)酵母菌形态观察

  1.酵母菌的话体染色观察及死亡率的测定

  (1)以无菌水洗下PDA斜面培养的酿酒酵母菌苔,制成菌悬液。

  (2)取0.05%美蓝染色液1滴,置载玻片中央,并用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀,染色2~3min,加盖玻片,在高倍镜下观察酵母菌个体形态,区分其母细胞与芽体,区分死细胞(蓝色)与活细胞(不着色)。

  (3)在一个视野里计数死细胞和活细胞,共计数5~6个视野。

  酵母菌死亡率一般用百分数来表现,以下式来计算:

  死亡率=死细胞总数÷死活细胞总数×100%

  2.酵母菌液泡系的话体观察 于干净载玻片中央加一滴中性红染色液,取少许上述酵母菌悬液与之混杂,染色5min,加盖玻片在显微镜下观察。细胞无色,液泡呈红色。

  3.酵母菌细胞中肝糖粒的观察 将1滴碘液置于载玻片中央,接人上述酵母菌悬液,混匀,盖上盖玻片,显微镜观察,细胞内的贮躲物资肝糖颗粒呈深红色。

  4.酵母菌子囊孢子的观察

  (1)活化酿酒酵母:将酿酒酵母接种至新颖的麦芽汁培养基上,置28C培养2~3d,然后再移植2~3次。

  (2)转接产孢培养基:将活化的酿酒酵母转接至醋酸钠培养基上,置30℃恒温培养14d。

  (3)观察:挑取少许产孢菌苔于载玻片的水滴上,经涂片、热固定后,加数滴孔雀绿,lmin后水洗,加95%乙醇30S,水洗,Zui后用0.5%沙黄液复染30S,水洗往染色液,Zui后用吸水纸吸干。制片干燥后,镜检,子囊孢子呈绿色,子囊为粉红色。注意观察子囊孢子的数目、外形和子囊的形成率。

  (4)盘算子囊形成的百分率:计数时随机取3个视野,分辨计数产子囊孢子的子囊数和不产孢子的细胞,然后按下列公式盘算:

  子囊形成率(%)=3个视野中形成子囊的总数

  ÷3个视野中(形成子囊的总数+不产孢子细胞总数)×100%

  5.酵母菌假菌丝的观察 取一无菌载玻片浸于溶化的PDA培养基中,取出放在温室培养的支架上,待培养基凝固后,进行酵母菌划线接种,然后将无菌盖玻片盖在接菌线上(图12—1),28℃培养2~3d后,取出载玻片,擦往载玻片下面的培养基,在显微镜下直接观察。可见到芽殖酵母形成的藕节状假菌丝,裂殖酵母则形成竹节状假菌丝(图12—2)。

  6.自然状况下的酵母菌观察 取一滴美蓝染色液于载玻片中央,春夏秋季取酱油或淹菜上的白膜,冬季取腌酸菜汤上的白膜,将其置于载玻片染色液中,盖上盖玻片,显微镜下细心观察酵母菌形态,出芽生殖,假菌丝等。

  四、注意事项

  1.用于活化酵母菌的麦芽汁培养基要新颖、表面湿润。

  2.在产孢培养基上加大移种量,可进步子囊形成率。

  3.通过微加热增添酵母的死亡率,易于观察死亡细胞。

  五、实验报告

  (一)绘图

  1.数个酵母菌细胞,示观察到的构造。

  2.数个子囊及子囊孢子形态图。

  (二)记载并计数酵母菌的死亡率及子囊形成率(原始记载及计算成果)。

  六、问题和思考

  1.酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有何差别?

  2.如何差别养分细胞和开释出的子囊孢子?

  3.试设计一个从子囊中分别子囊孢子的实验计划。

  注:

  酵母菌的简易培养 配2%葡萄糖水(或自糖水),煮沸,装进三角瓶中(液面高度2~2cm ),加HCl调至pH3~5放进几块葡萄皮(或其他糖分较高的果皮),置5~28℃温箱中培养2~3d,闻到酒香味后,即可取培养液镜检


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