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　　一、正定型法

　　【目标】控制用盐水介质法进行ABO血型体系(ABO group)正定型(directtyping)的原理、操作方式和结果判断。【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，依据红细胞是否涌现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。

　　【器材】1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。2.尖滴管、胶吸头。3.吸管、吸耳球。4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。5.离心机。6.显微镜。

　　【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，请求如下：（1） 人血清ABO血型抗体：①特异性高。②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。③亲和力：反应开端15s内即呈现凝集，3min时显明凝集，血凝块大于1mm2。④稳固性高。⑤已灭活补体。（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。②亲和力：以开端反应到涌现凝集的时光表现抗血清的亲和力，国度标准是抗A对A1、A2、A2B分离为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。③凝集效价：国度标准是抗A1、抗B均大于1∶128。④稳固性：较人血清抗体的稳固性低。2．生理盐水。

　　【标本】抗凝静脉血或末梢血。

　　【操作】

　　制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，参加生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充足混匀。2 500r/min离心3 min后弃往上清液，反复洗涤3次。自管底汲取1滴压积红细胞加进19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。操作示看法图4-1。图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图

　　玻片法

　　（1）标志玻片或白瓷板：取干净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。

　　（2）加标准抗血清：在玻片或白瓷板已标记的区域内分离滴加抗A、抗B标准抗血清各l滴。

　　（3）加被检红细胞悬液：在滴加抗A、抗B标准抗血清的小格中分离加被检者5%红细胞生理盐水悬液各1滴；不断轻轻转动玻片或白瓷板，使血清与红细胞充足混匀，持续约1～5 min，室温放置15～30min。

　　（4）视察结果：肉眼视察有无凝集(或溶血)反映，再用低倍镜观察，判定阴性、阳性和阳性强度。

　　① 凝集判定标准：如红细胞呈均匀散布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞疏散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞呈现凝集为阳性。

　　②凝集强弱水平断定标准：有助于发明A、B亚型，类B抗原。在低倍镜下判定标准见表4-1、图4-2。

　　表4-1

　　红细胞凝集强度 判断标准凝集水平 判断标准

　　4+ 红细胞凝集成一大块， 血清清楚透明

　　3+ 红细胞凝集成数小块， 血清尚清楚

　　2+ 红细胞凝块疏散成很多小块， 四周可见到游离红细胞

　　1+ 肉眼可见大颗粒， 四周有较多的游离红细胞

　　± 镜下可见数个红细胞凝集在一起， 四周有很多游离红细胞混杂凝集外观(mixedfield，MF)

　　镜下可见少数红细胞凝集，而尽大多数红细胞仍呈疏散散布

　　－ 阴性镜下未见细胞凝聚， 红细胞均匀散布

　　表4-2ABO血型鉴定成果断定

　　正定型（标准血清+被检者红细胞） 被检者血型反定型（标准红细胞+被检者血清）

　　抗A 抗B A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞

　　＋ － A － ＋ －

　　－ ＋ B ＋ － －

　　＋ ＋ AB － － －

　　－ － O ＋ ＋ －

　　图4-3ABO血型鉴定结果判断

　　（6）报告方法：正定血型（玻片法） X型。

　　（7）操作示看法图4-4。图4-4ABO血型鉴定正定型玻片法操作示意图


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