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显微镜的应用

https://www.optical17.com 来源:原创 日期:2011-6-28 10:28:45
  :这是在12月份ESAVS的试验室课程中分发的有关如何使用显微镜的使用先容,以前从来没有想到过要写这篇文章,我Zui早从初中就开始在使用显微镜,Zui初是从单目标Zui简略的那种反光镜式显微镜开始用起(还记得那时观察的是植物根的不同层次),后来在高中生物课,大学的组胚和病理课程又有了很多的使用操作和培训,至于后来到了德国LABOKLIN实验室,那一年多的时间几乎天天就是和显微镜一起过的,所以从来没有认识到显微镜的使用有什么问题,个人感觉这应该属于临床医生Zui为基础的技巧之一,如果我跑来讲显微镜怎么用,可能很多临床医生会感到受到了凌辱,就像现在有人跳出来说要教你如何吃饭一样让人不可接收。上个月在杭州的ESAVS皮肤病学课上,Dr. Koch提到了这个问题,他说在德国很多兽医师实在并不知道怎么恰当的使用显微镜,他信任在中国也有相似的情况,可能有一部分兽医师也是没有准确恰当的使用显微镜,导致漏诊,误诊,Zui严重的是导致很多兽医师不再愿意使用显微镜,所以他建议写这样一篇文章以求能够推广正确恰当的方式(在课程上的确看到很多很简单的误操作的情形)。我不敢说我写的这篇使用先容正确或是恰当,只能算作是自己的一家之言和个人经验,希看能够有必定的参考价值,每个人使用的习惯可能都有不同,每个人都可能有自己的窍门和经验,希看能得到大家的探讨和指正(先抛块砖出来先……)。(文章中有三分之一的部分是从查到的材料中翻译的,其他部分是自己依照平时的经验所写的,但是朋友看了后说我自己的话也很有翻译的感到,认为我这是完整翻译的,有些吐血,有些愁闷,因为很大一部分确切是我自己写的,但是现在写这种文章,稍不注意就是翻译的语气,可能是平时翻译的文章做多了的缘故--英文语法原来就差,现在更是把中文的语法一起学差了,唉……)

  如何适当的使用显微镜

  陈宇驰

  

  

  显微镜是我们兽医日常诊疗Zui常用的诊断装备之一。它在很多不同的兽医范畴中有很多的用处,例如检讨螨虫,皮肤刮片,拔毛检查,微生物检查,还在Zui常用和重要的细胞学和组织病理学上有很重要的作用。不过固然它在我们的日常诊疗工作中如此重要,但是我们仍然看到有很多的临床兽医师过错或是不恰当的使用显微镜,由此而导致误诊,或是完全错失了诊断。因此纳博科临(LABOKLIN)动物临床检验实验室上海分部试验室写出了这个简略和基本的使用领导,希望能够明白和提供一些有关如何恰当的使用显微镜的指南。我们诚挚希看这个指南能够给临床兽医师提供一些辅助。如果需要更具体的信息,欢迎打电话或是发送邮件至纳博科临(LABOKLIN)动物临床检验实验室上海分部实验室,我们乐于为您供给更多的协助和建议。

  1.断定光路的对位正确

  如果愿望获得幻想的图像质量和正确的计数值,断定对位的准确是非常主要的条件条件。传统相机,数码相机和电子图像能够供给比我们肉眼直接察看更明白的构造细节。但是图像的质量和精确度仍然重要取决于适当的显微镜对位和调节。但是如果你盼望检讨所有部件的对位,你须要一个有专业的技巧职员和一本操作手册来完成这个步骤,这很难由你独自在诊所中完成。不过你可以相对简略的检查对位的中心性,这样可以比拟明白的肯定显微镜是否处于幻想的工作状况。封闭光圈,检讨物镜以断定光圈的中心地位,如果不在中心则是有问题的。同时开放光圈,检查在聚光器光圈四周反射的图像,这些图像应当是非常对称的。(假如你需要有关对位检查的更多信息,您可以接洽您的显微镜的生产厂商,或者也可以发送邮件到纳博科临(LABOKLIN)动物临床检验试验室上海分部实验室。

  2.适当和舒适的坐姿,以求能够长时光的使用显微镜进行工作

  a)调剂座椅高度,以便你的脚能够舒适的放在地面上,让你的两侧大腿背侧所受到的压力均等。要坐在椅子中,而不要将脚放到椅子下面或是放在椅子底部,由于这样会加重髋部的累赘,让你很短的时光内就会感到不舒畅。要注意经常转变脚放置的地位,以求能够均衡的疏散背部和腿部肌肉的负荷。

  注意:可在不斟酌显微镜高度的情形下调整座椅的舒适度。

  b)调整显微镜的位置,以便你能够在不显明前倾的情况就能够通过目镜进行观察。这请求进行2个调整步骤:首先,调整显微镜的程度位置,以使其目镜靠近桌面的前缘。其次,调整显微镜的垂直高度以使其更高一些,以求能够更加的舒适。这样的调整可能需要在桌面上增添一个的平台以垫高显微镜。

  进行以上的这些调剂,都是为了在你应用显微镜时能够伸直背部,这样你的头能够坚持在竖立体位,这样更有利于更长时光的工作。透过显微镜目镜进行察看时应该是以眼光向下的姿态进行视察,而不是弯颈探头进行观察,否则很轻易造成颈背部肌肉的疲劳和损伤。由于桌子的高度固定,所以你应该调节座椅的高度,以便能够透过目镜进行观察。因此有的时候可能你须要放置一张脚凳。放置显微镜的台桌应当能够至少能够提供应大腿必定的运动空间。

  3.恰当应用显微镜的基础步骤

  n 将显微镜放置在有足够空间便于你的工作的桌面或是其他平坦坚实的平面上。我们见到过很多的兽医诊所/医院将显微镜放在一个拥挤的角落,在显微镜周边没有足够的空间放置玻片或是参考书籍,这种情况将在你使用显微镜工作时不断给你一个不舒适的感觉,这可能减少你破费在样本检查上的时间,因而增高你做出误诊或是错失诊断的几率。斟酌到显微镜在日常诊疗工作中的重要性和普遍用处,将显微镜放置在一个舒适的角落,并有足够的空间可供使用是使得你或是你的员工能够爱好使用显微镜进行检查的一个重要因素。

  n 打开显微镜光源,将载玻片放置到载物台上,稳固的固定好以保证在移动玻片或是转换镜头时玻片不会产生移动。须要将聚光器放置到适合的地位以求能够看到Zui好的细节信息(例如找到小的细菌)。为了能够到达这个目标,聚光器应该先放置在载物台上的玻片之下。然后在高倍镜下(例如40X镜),先聚焦到玻片上的细胞之上。完整封闭在显微镜底部的光圈,然后聚光器小范畴的高低移动,直到视野中的光圈具有锋利的边沿。然后就应该将聚光器坚持在这个比拟幻想的位置。然后将这个光环调整到视野的中心位置,随后打开光圈直至视野中没有暗影存在。随后逐渐闭合聚光器上的光圈,直到感到视场中的光强度开端有轻度的下降(5%-10%的水平);经过这样的调剂,就应当能够更好的看到细胞内的构造。

  n 旋转粗准焦螺旋直到样本层位于焦点位置。旋转细准焦螺旋直到样本明白聚焦。然后调节光圈至Zui适合的光照强度。从Zui大的光照强度开端,然后逐渐减少进光量直到样本具有一个清晰锋利的对照度。这种操作对于尿液沉淀样本或是皮肤刮片样本尤其主要,通过减小光圈增高比较度对于使这些未染色的物资显影是非常重要的,否则会由于视野太亮而无法看到细胞。除此之外,假如只是愿望获得形态方面的信息,临床医生可能只是盼望能够很轻易的找到诸如寄生虫卵,尿液管型或是在血细胞计数器中的血小板的话,那么只需要把聚光器移到Zui低的位置就能够到达这个目标,聚光器处在这个Zui低的位置上能够供给Zui好的对照度。

  n 旋转物镜旋转盘到Zui低倍物镜(通常是4倍物镜)。在低倍镜下扫看整张玻片(从右到左,从上到下)以获得对样本的整体印象,因为在低倍镜下视野更大,因此在低倍镜下观察整张玻片就更为轻易。在你判读一张细胞学涂片的时候,这个扫视整张玻片的步骤就更为主要,这样能够让你能够更容易更快速的找到需要使用高倍镜进行判读的区域,更重要的是这个步骤能够下降你漏看能够做出准确诊断涂片部分的几率。因此做任何显微镜涂片的判读都要从低倍镜开端,然后将你愿望在高倍下观察的区域放置到中心位置。

  n 假如你发明了适于进行判读的适合区域,或是需要察看更多的细节信息,旋转物镜旋转盘至10倍物镜。重新进行聚焦并细心观察样本。然后再次对光照强度进行调节,以便获得Zui为清楚的图像(高倍镜下你可能需要更多的光照)。可以在40X物镜下使用同样的步骤进行操作,在这个物镜放大倍数下你能够看到你日常诊疗所需的大部分所必须的细节信息。但是请注意,应用瑞氏染色一类的染色方式进行染色的细胞在40X的物镜下视察会发明细胞表示含混,无法看清细节,由于这些细胞四周有空气的存在,这会转变其折光率导致这样的高倍物镜无法聚焦。使用封片胶盖上盖玻片或是滴上一滴油后盖上盖玻片能够辅助往除在细胞四周的空气,这样在高倍的干性镜头下能够看到更好的细节信息(或者也可只是盖上一张盖玻片,而不需再滴加任何介质或是浸油,这也可赞助获得更好的解析度)。

  n 但是如果你试图找出病原微生物(细菌,真菌孢子或是酵母菌)或是判定有无肿瘤细胞的恶性尺度,那么就可能需要使用更高倍的放大倍数。你应该在你盼望观察的部位滴上一滴显微镜浸油,然后旋转100X的油镜接触到这滴显微镜浸油。一旦使用了显微镜浸油进行视察,那么在将玻片上的浸油完整擦往以前都不能再使用40X的物镜观察玻片,否则会极大的破坏40X物镜的镜头。如果在100X油镜下细胞能够聚焦,而在高倍的40X物镜下无法聚焦,则阐明40倍的物镜已经被浸油所污染,这种情形下就需要使用棉签浸湿擦镜试剂对镜头进行清算。

  


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