显微镜,显微镜价格,显微镜的价格

　　如何选择二抗作者:admin | 起源:qwbio | 更新时光:2009/11/3 通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到Zui适合该实验的二抗，须要综合以下几个方面进行斟酌：

　　1 一抗的物种来源

　　一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应该选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无显明的影响。

　　2 一抗是属于哪个类或亚类

　　二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体.

　　单克隆抗体的种别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应该是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。

　　假如单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之联合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，假如你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标志实验中尤其合适。

　　如果你不知道一抗是哪一类别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

　　下面总结了几种具有不同特异性的二抗：

　　针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如anti-IgG(H+L)，此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合，即与抗体分子的 Fc，F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应，anti-IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（?链或?链）。

　　针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以结合，由于它们可以与轻链反应，它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。

　　这对Fc片段或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反应，一次它们是类别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反应，mu链特异性抗体只识别IgM，依此类推）。

　　轻链（lambda，kappa）特异性：与所有类别的抗体反响，因为所有类别的抗体均具有雷同的lambda链或kappa链。

　　经过吸附处理的二抗：不同来源的免疫球蛋白含有类似的构造，抗一个物种的抗体可能与其他物种产生交叉反应，一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处置，以减少非特异性背景。例如，如果是小鼠的组织或细胞，那么选择经小鼠血清或IgG吸附处置过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体识别表位的数目被大大减少。

　　3 选择哪种情势的二抗，是全部IgG分子，F(ab’)2片段，还是Fab片断？

　　全部IgG分子：此种抗体适用于多数情况。

　　F(ab’)2片段：该种抗体是由两个靠二硫键衔接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。

　　Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。

　　4 选用耦联有哪种探针的二抗？

　　一般来讲，耦联到二抗上的探针重要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA，Zui常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以应用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大水平的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测体系。

　　下面简略先容几种二抗探针的优缺陷及其实用的实验：

　　酶：

　　重要有两种不同的酶耦联物，HRP和AP。比拟而言，前者更经济、快速、稳固，而后者较前者更为敏锐，通常情形下，HRP普遍利用于免疫组化，western blot和ELISA中，而碱性磷酸酶（AP）更合适于固相的免疫检测实验，如ELISA和western blot.

　　荧光基团：

　　FITC：FITC是普遍使用的荧光基团，但其Zui大的毛病是淬灭快，使用抗淬灭剂可以减轻。

　　AMCA：常用在多标记实验中，如免疫荧光、流式细胞术。其缺陷是，淬灭快，且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更实用于检测大批存在的抗原。

　　花青染料（Cy2,Cy3,Cy5）：Cy2比FITC更稳固，且在表面荧光显微镜下，Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳固，背景更弱。二者常在共聚焦显微试验中作多标志。但Cy5的毛病是不能用表面荧光显微镜察看，因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜视察。

　　TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中，也可以使用RRX或TR，但TR会发生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2（或FITC）及Cy5一起使用，因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，且和这两者的重叠很少。

　　PE：常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。

　　生物素：

　　生物素（biotin）可以和抗生素蛋白（avidin）产生不可逆反应而紧密结合在一起。首先加进生物素标记的二抗，在参加耦联有酶或荧光团体的 avidin、ExtrAvidin或streptavidin，后者能够结合于二抗表面的多个位点上，从而极大的放大检测信号。

　　5 抗体的纯度：

　　亲和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎，因为这些产品的纯度Zui高，产生的非特异性背景Zui少。但是有些情况下也要考虑到纯化进程中丧失的IgG部分，因为其中含有亲和力很高的抗体，尤其是当目标抗原存在的量很小的时候，高亲和性的IgG部分就显得尤为主要

　　

　　通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到Zui合适该实验的二抗，须要综合以下几个方面进行斟酌：

　　1 一抗的物种起源

　　一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应当选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无显明的影响。

　　2 一抗是属于哪个类或亚类

　　二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体.

　　单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应该是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。

　　如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

　　假如你不知道一抗是哪一种别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，由于此种抗体可以辨认大多数类型的IgG免疫球蛋白。

　　下面总结了几种具有不同特异性的二抗：

　　针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如anti-IgG(H+L)，此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合，即与抗体分子的 Fc，F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应，anti-IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（?链或?链）。

　　针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以联合，由于它们可以与轻链反响，它们同时也已和具有雷同轻链的其他种类的免疫球蛋白反映。

　　这对Fc片断或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反映，一次它们是种别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反响，mu链特异性抗体只辨认IgM，依此类推）。

　　轻链（lambda，kappa）特异性：与所有类别的抗体反映，因为所有类别的抗体均具有雷同的lambda链或kappa链。

　　经过吸附处置的二抗：不同起源的免疫球蛋白含有类似的构造，抗一个物种的抗体可能与其他物种产生交叉反应，一次有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理，以减少非特异性背景。例如，如果是小鼠的组织或细胞，那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体辨认表位的数目被大大减少。

　　3 选择哪种情势的二抗，是整个IgG分子，F(ab’)2片段，还是Fab片段？

　　全部IgG分子：此种抗体适用于多数情况。

　　F(ab’)2片断：该种抗体是由两个靠二硫键衔接的用于联合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情形中，如须要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。

　　Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。

　　4 选用耦联有哪种探针的二抗？

　　一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE）和生物素。选用哪种探针的二抗重要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA，Zui常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，数码显微镜，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大水平的放大检测信号，可以应用biotin/avidin检测体系。

　　下面简略先容几种二抗探针的优毛病及其实用的试验：

　　酶：

　　主要有两种不同的酶耦联物，HRP和AP。比拟而言，前者更经济、快速、稳定，而后者较前者更为敏锐，通常情况下，HRP普遍利用于免疫组化，western blot和ELISA中，而碱性磷酸酶（AP）更适合于固相的免疫检测实验，如ELISA和western blot.

　　荧光基团：

　　FITC：FITC是广泛使用的荧光基团，但其Zui大的缺点是淬灭快，使用抗淬灭剂可以减轻。

　　AMCA：常用在多标记实验中，如免疫荧光、流式细胞术。其缺点是，淬灭快，且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大批存在的抗原。

　　花青染料（Cy2,Cy3,Cy5）：Cy2比FITC更稳定，且在表面荧光显微镜下，Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳定，背景更弱。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺陷是不能用表面荧光显微镜视察，因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜察看。

　　TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标志试验中，也可以使用RRX或TR，但TR会发生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2（或FITC）及Cy5一起应用，由于RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，且和这两者的重叠很少。

　　PE：常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。

　　生物素：

　　生物素（biotin）可以和抗生素蛋白（avidin）发生不可逆反应而紧密结合在一起。首先加进生物素标记的二抗，在参加耦联有酶或荧光团体的 avidin、ExtrAvidin或streptavidin，后者能够结合于二抗表面的多个位点上，从而极大的放大检测信号。

　　5 抗体的纯度：

　　亲和层析纯化的抗体一般更受人们欢迎，因为这些产品的纯度Zui高，发生的非特异性背景Zui少。但是有些情形下也要斟酌到纯化进程中丧失的IgG部分，由于其中含有亲和力很高的抗体，尤其是当目标抗原存在的量很小的时候，高亲和性的IgG部分就显得尤为主要


本文地址:https://www.optical17.com/news/75.html
出自: 显微镜报价网 转载时请标明出处.